Première partie : les cellules en général
Propriétés et définition
Cellule: c’est l’unité structurale de la vie- Les cellules sont organisées en tissu. On répertorie dans le corps humains 4 groupes de tissus fondamentaux: le tissu épithélial, le tissu conjonctif, le tissu musculaire, et le tissu nerveux. On retrouve deux catégories de cellules majeures: eucaryotes et procaryotes.
Rappel à propos des cellules eucaryotes et procaryotes
Eucaryotes
Chez qui ? Humains, plantes, champignons
Caractéristiques spécifiques
Présence d’un noyau entouré d’une enveloppe nucléaire
Présence d’organites membraneux dans le cytosol
Présence d’un cytoplasme, cellules de grande taille pour la pluparts
Caractéristiques communes aux eucaryotes et procaryotes
Cellules entourées par une membrane + information génétique sous forme d’ADN
Procaryotes
Chez qui ? Bactéries
Ses caractéristiques particulières :
Absence. De noyau: l’information génétique (ADN) est contenue dans une région appelée nucléoide•Aucun organite membraneux •Taille plus réduite
Le contenu d’une cellule eucaryote
Noyau
Organite le plus important de la cellule
– contient l’info génétique (ADN, chromatine)
– pas présent de façon permanante – délimité par une enveloppe.
Sur la face interne ==> réseau de lamine.
Sur la face externe ==> REG et ribosomes.
– enveloppe discontinue: pore nucléaires.
CYTOPLASME ET ORGANITES
Organite: compartiments différenciés de la cellule qui ont une fonction particulière. On retrouve RE, AG, mitochondires, peroxysomes, lysosomes.
MEMBRANE PLASMIQUE
Bicouche lipidique qui contient des protéines.
Seconde partie : méthode d’étude des cellules
Définitions
Cytologie: étude des cellules.
prélèvements:
Frottis: collecte des cellules superficielles à l’aide d’une petite brosse.
Brossage: collecte de cellules un peu plus profondes.
Ponction: prélèvement de liquide à l’aide d’une aiguille.
Histologie: étude des tissus.
prélèvements:
Biopsie: prélèvement d’une petite partie de tissu ou d’organe.
Exérèse: prélèvement de l’intégralité (ou quasi-totalité) d’un organe ou tissu.
OUTILS DE DESCRIPTION:
•oeil. Il permet identification, description et sélection des zones d’intérêt. Son pouvoir discriminant reste néanmoins faible.•Microscope. Il permet d’agrandir une image et de réaliser un contraste. Il est caractérisé par un pouvoir de résolution.
Microscope optique MO
Pouvoir de résolution : 2 micron, ne permet pas de voir les virus
Technologie : utilisation des photons
Autre :
Beaucoup de types de MO. Coloration fréquente des coupes.
Microscope fluorescent
Technologie :
Utilisation des phtons de haute énergie: gamme des UV
Autre :
Utilisation de fluorochrome dans la préparation. (Molécules qui lors de l’excitation se colorent)
Microscope électronique ME
Pouvoir de résolution :
2nm Les virus peuvent être observés, tous comme les éléments particuliers (synaspses, système de jonctions..)
Technologie : utilisation des éléctrons
Autre:
Deux types de ME:
MEB (balayage, surface de la cellule)
MET (transmission, intérieur de la cellule)
GESTION DES PRELEVEMENTS:
LES ETAPES
Etape 1: Prélèvement. Le tissu n’est plus oxygéné/nourri = état d’urgence. Il faut décider des techniques à utiliser selon nos obsjectifs, et Q diagnostiques. On parle d’état frai.
Etape 2: On peut réaliser des options, parmi lesquelles on trouve: – congélation – apposition- fixations particulière (pour ME par exemple).
Etape 3:fixation. Il s’agit d’une immobilisation définitive du tissu, dans l’état dans lequel il se trouve (=prévient de la dégradation). Elle se fait par le moyen de fixateurs (formol neutre tamponné+++)
Etape 4:Macroscopie. Il faut sélectionner des zones d’intérêt du tissu, les placer dans une caissettes plastique, et les décrire. (Etape 4bis):décalcification. Il s’agit d’enlever. Les cristaux de calcium possiblement contenu dans nos fragments de tissu. Cette étape est. OBLIGATOIRE si le tissu du Ca, mais interdite dans le cas contraire. Elle se fait toujours après la fixation.
Etape 5:inclusion. Il s’agit de rendre plus ferme la pièce pour permettre une coupe fine de celle ci. Elle se réalise en 3 étapes, dans lesquelles la pièce est au final enrobée dans de la paraffine.
Etape 6:coupe. Elle se fait au microtome, et permet d’obtenir des tranches de 3 à 5μm d’épaisseur.
Etape 7: préparation de la coloration et coloration. Avant de colorer la coupe, il faut déparaffiner (car la paraffine rend imperméable les coupes), réhydrater. On peut ensuite effectuer la coloration. Pour finir, la coupe devra être déshydratée avant d’être observée et analysée.
IHC: Immunohistochimie
Technique qui permet de repérer des protéines caractérisant une cellule ou un tissu (ex: cytokératine dans les cellules épithéliales, neurfilament dans les neurones, GFAP dans les cellules gliales, desmine dans les cellules musculaire…)
Elle est basée sur le fonctionnement de la réponse immunitaire. Des anticorps sont produits (de façon mono ou polyclonale). Ce sont eux qui permettent la reconnaissance des protéines ==> reconnaissance d’antigène spécifiques sur la cellule, et fixation de l’anticorps au niveau d’un épitope. Le repérage de ces anticorps est variables.
Trois méthodes:
– IHC directe : l’anticorps est associé à un fluorochrome qui devient «lumineux» lors de l’excitation par des photons (sur une MO).
– IHC immunogold. L’Ac est lié à une particule d’or ==> cela permet de repérer les Ac en ME
– IHC indirecte: il y a deux couches d’Ac, appartenant à des espèces animales différentes.